鸡群免疫监测中采血操作时应注意的技术问题
鸡群免疫监测中采血操作时应注意的技术问题
鸡群的科学免疫监测及分析对鸡群生产、防疫具有重要的指导意义。
为彻实做好这项工作，养鸡技术员和实验室的工作人员付出了相当大的努力。但是由于疾病的复杂性以及有关部门的人事调动、培训不及时、不到位的原因，技术员的采血工作出现了许多不应有的技术性细节问题，造成抽样样本过少，血清不能晰出或晰出量不够等，给实验室的后续工作带来了不必要的困难，为了能更好的避免和解决上述问题，笔者对鸡体的采血技术进行了以下阐述：
1．鸡群抗体监测的样本大小 对鸡群抗体监测需要的血清样本数量与鸡群大小、发病率有关。商业鸡群抗体水平变化较大，因此，如果从15000羽鸡群要获得代表性样本，则需要100份。这从经济上考虑并不是太合理，所以，大多数鸡群抗体监测所需要样本数是10～30份。为了尽可能更好地估计抗体水平（如原种群和祖代群），则需要较大的样本数。虽然对于抗体水平监洋，从一个大的鸡群采集少于10份样本取得的结果是无意义的，但单个血清阳性结果对于一些病原来说，在流行病学上还是具有一定意义的。
2．采血前的物品准备 鸡静脉采血前要准备好的物品根据实际包括：酒精棉球及消毒过的干棉球、一次性注射器（大鸡一般5ml，小鸡可选1～2.5ml用前将针头旋转拧紧，使切面与针筒的刻度面同在一个水平面上，最后才撕开外包装，由于新的注射在使用前活塞项部和针筒的底部会有轻微的粘连，所以为避免采血回拉活塞过程中会引起回抽困难的情况，用前应该先拉松）、1.5ml一次性塑料离心管、高压灭菌后的0.01mol磷酸缓冲液（或生理盐水）、油性记号笔、收集离心管用的塑料袋、废液收集瓶等。
3．采血操作 大鸡翅膀根静脉采血时，最好一人保定鸡，一人持注射器采血。保定鸡的人员从鸡的背部开始，右手抓鸡两翅膀，左手抓鸡双脚，将鸡侧放于地面，让鸡翅膀根部静脉与两人右肩膀的对角连线几乎平行重叠，以方便采血操作。用酒精棉球消毒术区后即可进针，为避免血液直接滴出体外造成鸡体失血过多，应该从与血管成垂直线大约
血管过细的雏鸡一般采用心脏采血，术者将雏鸡鸡头朝向术者，仰卧于掌心，并使雏鸡双脚夹于左手的食指和中指间隙中，鸡脖子则用大拇指压于小指上。先用右手的手指轻压以感知雏鸡锁骨围成的“V”型凹窝的确切位置，再用酒精棉球消毒“V”型区，并将被酒精浸湿的羽毛向“V”型区外拨开，充分暴露术区。然后将1～2.5ml注射器与鸡体躯纵轴成30度的方向，针头切面向上，并从“V”型区靠近胸部的小夹角处轻轻刺进约0.5～1cm（因雏鸡大小而异），进针过程如感觉阻力很大，则可能刺中肌肉或骨头，应退后稍微调整进针方向，同时应注意避免扎中囔囊。一边进针一边轻轻回拉注射器活塞，注意观察针筒内有无血液吸出，当发现有血液开始吸出时，必须保持注射器的位置不动，让血液缓缓吸入注射器针筒内，达到所需的采血量后，再用棉球轻压进针处拔出针头，左手的大拇指放开雏鸡的双脚，并保持压迫棉球状态约10秒后将雏鸡放掉即可。有的鸡由心脏采出的血液或鲜红或暗红，主要是因为所采出血液的部位是心房或心室，红细胞所含的CO2、O2等物质的含量有所不同而引起。
拔出针头后，针筒内的血液应立即缓缓注入离心管，血流速度一定不能太快，否则会破坏血小板，造成血液凝固不良，血清晰出量过少等，在离心管内的血液应成斜面状，勿将血液注满离心管，一般0.5ml为宜，然后将承装有血液的离心管平放，直致血液完全凝固前都不能振动，以最大限度的有利于晰出血清。原则上要一只鸡一支注射器，但考虑到成本因素，可用高压灭菌后的0.01mol磷酸缓冲液（或生理盐水）对采血后的注射器进行反复充分洗涤3～5次，将废液打进废液收集瓶，最后一次要对注射器进行反复空吹，以尽量排完针筒内残留的液体。该注射器如此反复处理后还可用于采下一羽鸡的血，但鸡体内的抗体是有差异的，所以为了尽可能的减少这种误差，实际操作中每采完3～5羽鸡的血后就应该更换一支新的注射器。
待血液凝固后用油性记号笔标识好鸡群相关信息，包括鸡群的饲养地点、饲养员、技术员、品种、数量、日龄、免疫情况、发病史等，最后分群存放并尽快送实验室处理，防止出现溶血和利于血清的晰出。倘若条件允许的地方还可以将血清与血凝块分离后，离心承装到小容积的塑料离心管中后冷藏或送检。
4．采血量 采血量应因检测疫病的项目、方法的不同而异。一般用H I试验只检测ND、AI和EDS-76的免疫抗体则只需采0.4～0.6ml的血液即可，如果还要用另外检测方法检测其它疾病则酌情再增加采血量，但承装的血液体积不能大于离心管容积的2/3为宜，以利于血清的晰出。根据经验，良好的处理程序，所收获血清的晰出量一般会与血凝块的体积相当。
对于禽群抗体监测，常常需要从一份试验血清检测出多病原或疫苗免疫后的特异性抗体水平，对相应疾病的诊断及免疫保护水平的预后进行分析参考，可见采血工作的重要性。以上是笔者在日常采血操作的一点体会，希望能给技术员在实际采血工作中有所参考。